Comparison of DNA extraction using proteinase K and extraction kit: analysis of the quality of the genetic material

CONCLUSION: Both methodologies studied can be used, and the PKM is cheap but a time-consuming method, while the co mmercial kit is more expensive, however DNA extraction is faster.RESUMO INTRODU ÇÃO: O ácido desoxirribonucleico (DNA) é a matéria-prima para os estudos genéticos, por isso são desenvolvidas técnicas laboratoriais para sua obtenção, com concentração e integridades adequadas. OBJETIVO: Comparar dois métodos de extração de DNA em relação à concentração e à i ntegridade da amostra. MÉTODOS: O DNA foi extraído da extremidade das caudas (2 mm de comprimento) de camundongos, as quais foram estocadas a -20ºC. Utilizou-se a metodologia de extração com proteinase K (MPK) e o kit Kappa Express Extract®. As concentrações e as relações 260/280 e 260/23 0 foram determinadas por espectrofotometria. A integridade do DNA foi verificada em gel de agarose a 2%, com brometo de etídeo. Para o teste final das amostras extraídas, realizou-se reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex, com primers para o gene Large. RESULTADOS: As amostras extraída s pela MPK apresentaram concentração média de 59,4 ± 18,5 ng/µl (260/280 = 1,74 ± 0,04 e 260/230 + 1,85 ± 0,14) e as extraídas pelo kit comercial, concentração média de 178,8 ± 42 ng/µl (260/280 = 1,09 ± 0,04 e 260/230 = 0,62 ± 0,66). A PCR amplificou o gene Large no DNA extraído, in dependente da metodologia utilizada. CONCLUSÃO: As metodologias estudadas podem ser utilizadas, se...
Source: Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial - Category: Pathology Source Type: research